贵州吉创生物技术有限公司免疫组化实验报告

1 细胞培养：

1)      传心肌细胞至24孔板：将细胞旧培养基抽出，加入2mlPBS洗2次，加入400μl  0.25% 胶原酶，37℃消化2min。

2)      加入完全培养基终止消化，吹打混匀，加入足量培养基，以500μl /孔向24孔板中加入细胞悬液（共传6个孔），37℃继续培养 。

2  实验操作：

1观察：24孔板中细胞生长正常，培养基透明澄清，未见明显微生物活动，覆盖约50%

2 操作：细胞鉴定---TNNI3（Assay biotech  B0588 ）免疫组化检测

1） 将24孔板旧培养基抽出，用PBS洗3遍，每次300μl。

2） 每孔加入300μl  4%多聚甲醛固定20min。

3） 弃掉多聚甲醛，PBS洗3遍，每次300μl，浸泡3min。

4） 使用康为世纪免疫组化染色试剂盒，货号CW2035S。（说明书另附）

5） 试剂一，常温孵育10min。

6）去掉试剂一加入PBS 洗三遍，加试剂二, 室温孵育10min 甩干。

7）加入1:100的TNNI3抗体（PBS稀释）4℃孵育过夜。

8） 抽掉抗体， PBS洗3遍，每次3min，

9） 加入试剂3 室温孵育10min。

10） PBS洗3遍，每次3min。

11） 加入试剂四,室温孵育10min。

12） PBS洗3遍，每次3min。

13）配置DAB染色剂，取1ml试剂B至1.5ml离心管中，滴加试剂A   2滴，漩涡打匀。

14） 在每孔加入显色剂300μl，显微镜下观察（显红色）。

15）结果如图。

1 培养：

1)      传心肌细胞至24孔板：将细胞旧培养基抽出，加入2mlPBS洗2次，加入400μl  0.25% 胶原酶，37℃消化2min。

2)      加入完全培养基终止消化，吹打混匀，加入足量培养基，以500ul/孔向24孔板中加入细胞悬液（共传6个孔），37℃继续培养 。

2 实验操作：

1观察：24孔板中细胞生长正常，培养基透明澄清，未见明显微生物活动，覆盖约50%

2 操作：细胞鉴定---α-Actin（Proteintech  23660-1-AP）免疫组化检测

1） 将24孔板旧培养基抽出，用PBS洗3遍，每次300ul。

2） 每孔加入300μl  4%多聚甲醛固定20min。

3） 弃掉多聚甲醛，PBS洗3遍，每次300μl，浸泡3min。

4） 使用康为世纪免疫组化染色试剂盒，货号CW2035S。（说明书另附）

5） 试剂一,常温孵育10min。

6）去掉试剂一加入PBS 洗三遍，加试剂二, 室温孵育10min 甩干。

7）加入1:100的TNNI3抗体（PBS稀释）4℃孵育过夜。

8） 抽掉抗体， PBS洗3遍，每次3min，

9） 加入试剂3 室温孵育10min。

10） PBS洗3遍，每次3min。

11） 加入试剂四,室温孵育10min。

12） PBS洗3遍，每次3min。

13）配置DAB染色剂，取1ml试剂B至1.5ml离心管中，滴加试剂A   2滴，漩涡打匀。

14） 在每孔加入显色剂300ul，显微镜下观察（显红色）。

15）结果如图。

结果该细胞大部分被染成红色，说明该细胞中含有α-Actin抗体。