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EXPERIMENT

蛋白实验检测

(一) WESTERN BLOTTING检测

蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色, 再通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

METHOD

实验方法

SHOW

实验结果展示

INSTRUCTIONS

实验服务说明

(二) ELISA检测

酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上, 利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

METHOD

分类方法

A、定性测定

定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答,分别用"阳性"、"阴性"表示。 "阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果,即用滴度来表示反应的强度, 其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中,将标本作一系列稀释后进行试验,呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。 根据滴度的高低,可以判断标本反应性的强弱,这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。

在间接法和夹心法ELISA中,阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反,阴性孔呈色深于阳性孔。

B、定量测定

ELISA操作步骤复杂,影响反应因素较多,特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致,因此在定量测定中,每批测试均须用 一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA,标准曲线的范围一般较宽, 曲线最高点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数值,以检测物的浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接, 所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于平坦,中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。测定小分子量物质常用竞争法, 其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中 横坐标为对数关系,这更有利于测定系统的表达。

(三) TUNEL法检测细胞凋亡

细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测, 可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测, 这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

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