源叶生物 / 2015-05-08
目的
1．学习微生物涂片和染色的基本技术，掌握细菌简单染色法；
2．学习无菌操作，并巩固显微镜的使用方法；
3．学习在油镜下观察细菌的个体形态。
原理
    由于细菌体积小、菌体透明，活体细胞内含有大量水分，且对光线的吸收和反射与周围背景没有显著的明暗差，因而很难在普通光学显微镜下观察它们的形态和结构。只有经过染色，借助颜色的反衬作用才可看清菌体形态以及菌体表面结构。染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。

   能够使微生物着色的化合物被称为染色剂，染色剂一般都是成盐化合物。目前普遍采用的微生物染色剂多为苯的衍生物，其化学结构中除含有苯环外，还连接有发色团和助色团。发色团可使化合物显色，而助色团则能增加色度，并因具有电离特性，可与菌体细胞相结合，从而使其着色。

   含有酸性助色团（如羟基-OH）的染色剂称为酸性染色剂，其电离后分子带负电，可与钠、钾、钙、氨等离子结合，多用于细胞质的染色，如酸性品红、刚果红等。含有碱性助色团（如氨基-NH2）的染色剂称为碱性染色剂，其电离后分子带正电，主要用于细胞核和异染粒等酸性细胞结构的染色。由于细菌细胞质中布满核物质和异染粒等结构，因此细菌染色一般采用碱性染色剂，通常包括氯化物、硫酸盐、醋酸盐或草酸盐等。
   细菌的简单染色，即只利用一种染色剂使菌体着色。此法操作简单，适用于细菌形态的观察。通常细菌的简单染色也采用碱性染色剂，如结晶紫或碱性品红等，碱性染料不是碱而是一种盐，电离时染料离子通常带正电荷。而在中性、碱性或弱酸性的溶液中，细菌细胞通常带有负电荷，这样带正电荷的染料离子就容易与带负电荷的菌体细胞相结合并使其着色。染色后便于观察细菌的形态、大小和排列方式等特征。