1关键词：胆碱、胆碱氧化酶、过氧化物酶、磷脂酶D
一、胆碱
胆碱是一种强有机碱，是卵磷脂的组成成分，也存在于神经鞘磷脂之中，是机体可变甲基的一个来源而作用于合成甲基的产物，同时又是乙酰胆碱的前体。
胆碱对人体的作用相当普遍，如促进脑发育和进步记忆才能、调控细胞凋亡、促进脂肪代谢、促进体内甲基代谢、降低血清胆固醇等。因而，在乳品中添加胆碱越来越遭到注重，世界许多国度，包括中国在内，均已将胆碱批准作为营养食品添加剂。
国标GB5413.20-2013婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定中规则了两种办法，酶比色法和雷氏盐分光光度法。鉴于目前传统的检测办法（雷氏盐比色法）不同水平的存在操作繁琐、选择性差、干扰要素多等缺陷，普通大型企业都会选择酶比色法。
二、胆碱的含量测定办法（酶比色法）
1、原理：胆碱经酸水解后边成游离态的胆碱，再经酶氧化后与显色剂反响生成有色物质，其颜色的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。
2、试剂
盐酸（1mol/L）:量取85ml的浓盐酸加水稀释至1000ml；
盐酸（3mol/L）：量取125ml的浓盐酸加水稀释至1000ml；
氢氧化钠溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000ml；
Tris缓冲溶液（0.05mol/L，PH=8.0±0.2）：称取6.057g三羟基氨基甲烷溶于500ml蒸馏水中，用1mol/L盐酸调PH至8.0±0.2，用蒸馏水定容至1000ml。此溶液在4℃冰箱可保管一个月；
酶反响显色剂：取100-120生机单位的胆碱氧化酶、250-280生机单位的过氧化物酶、75-100生机单位的磷脂酶D、15mg4-氨基安替比林和50ml苯酚置于100ml的容量瓶中，用0.05mol/L Tris缓冲液稀释至刻度。（现用现配）
胆碱氢氧化物规范品：称取102±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐523mg置于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度即为储藏液（冰箱冷藏不超越1周）；汲取储藏液10.0ml溶液与100ml容量瓶中，用水稀释至刻度即为工作液（现用现配）。
3、简易步骤
3.1样品制备：称取5g混合平均的固体样品（液体20g），于100ml锥形瓶中，参加30ml1mol/L盐酸溶液（液体样品10ml3mol/L盐酸溶液）；70℃水浴，水解3小时（每隔半小时摇匀一次），冷却，用氢氧化钠溶液调PH为3.5-4.0，转入50ml容量瓶中用蒸馏水定容；过滤水解液，滤液应是廓清，否则再虑，滤液放冰箱冷藏可保管3天。
3.2标曲制造：分别汲取2ml、4ml、6ml、8ml胆碱规范工作液于10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度；准备6支试管，一个做空白参加0.1ml蒸馏水，另5支分别参加0.1ml规范溶液和4个稀释梯度，再每个试管参加3ml酶反响显色剂；用密封维护膜盖住试管，混匀，把试管置于37℃水浴中保温反响15min；时间到后将溶液取出冷却至室温，再波长505nm处，用蒸馏水做空白，测定吸光值制造规范曲线。

3.3样品测定：将每个样品准备2支试管，分别参加0.1ml样品滤液，一个参加蒸馏水3ml做空白，一个参加3ml酶反响显色剂；用密封维护膜盖住试管，混匀，把试管置于37℃水浴中保温反响15min；时间到后将溶液取出冷却至室温，再波长505nm处，用蒸馏水做空白，测定吸光值，然后计算样品中胆碱的含量。

三、酶比色法中源叶能为您提供的试剂
1、胆碱氧化酶：CAS号9028-67-5  源叶货号S31014
2、过氧化物酶：CAS号9003-99-0
源叶货号S10061、S10062、S10063、S10064（不同纯度的）
3、磷脂酶D : CAS号9001-87-0 源叶货号 S25117、S31760
4、4-氨基安替比林: CAS号83-07-8 源叶货号 B34212